Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Hormozgan University of Medical Sciences

Thesis #6190

[error in script] (2019) نقش ‮‭microRNA-146a‬ بر بیان ژنی فاکتور هسته ای کاپای ‮‭B‬ در سلول های اندونلیال عروق بند ناف انسانی طی هیپرگلایسمی. پایان نامه مقطع Masters.

[img] Image
doustaki zaboli.jpg
Restricted to Repository staff only

Download (377kB)

Abstract

دیابت یک اختلال متابولیک است که با هیپرگلایسمی مداوم همراه بوده و از ترشح ناکافی انسولین، کاهش حساسیت بافتی به انسولین و یا هر دو عامل مذکور ناشی می شود. دیابت مزمن معمولا باعث عوارض میکرو و ماکروآنژیو پاتی همچون کاردیومیوپاتی، نوروپاتی و نفروپاتی می گردد. اعتقاد بر این است که هایپرگلایسمی از طریق مختلف از جمله بر هم زدن تعادل اکسید و احیای سلولی منجر به فعال شدن فعالیت فاکتور هسته کاپا- نوع B (Nuciear Factor Kappa B, NF- KB که یک فاکتور نسخه برداری التهابی است، می شود. NF-KB پس از فعال شدن، نسخه برداری ژن سایتکوکاین های التهابی را افزایش می دهد به این ترتیب منجر به پیشبرد التهاب می شود. MicroRNA ها گروهی از RNA های درونژاد کوچک تک رشته ای ( حاوی ۲۰ الی ۲۶ نوکلئوتید) و غیر قابل کد شدن هستند که توسط RNA پلی مر از II و III در هسته سلول ساخته شده و پس از مهاجرت به سیتوپلاسم، با اثر بر RNA ها پیک ( mRNA) و مهار ترجمه و یا افزایش تخریب آن ها، در تنظیم فرآیندهای نسخه برداری و سنتر پروتئین ها شرکت می کنند و در فرآیندهای فیزیولوژیک متعدد نظیر رشد، تمایز و مرگ سلولی و نیز در بروز پاسخ های ایمنی و التهابی نقش دارند. miR-۱۴۶a یکی از MicroRNA ها است که مهمترین نقش آن در فرآیندهای التهابی نشان داده شده و به یک MicroRNA التهابی موسوم است. همچنین نشان داده شده که نقش خود را در فرآیندهای التهابی از طریق تغییر فعالیت NF-KB انجام می دهد. با توجه به فعال شدن NF-KB طی هیپر گلایسمی ناشی از دیابت احتمال می رود miR-۱۴۶a در پاتوژنز دیابت نقش داشته باشد. هدف از مطالعه حاضر بررسی نقش microRNA-۱۴۶a بر بیان ژنی NF-KB در سلول های اندوتلیال عروقی طی هیپرگلایسمی می باشد. مواد و روش ها: کشت سلول: سلول های اتدوتلیال عروقی بند ناف انسانی () در محیط کشت ویژه سلول های اتدوتلیال کشت شدند. پس از رشد سلول های و افزایش تعداد آن ها به هشت گروه که شامل: ۱- کنترل (۵ میلی مولار گلوگز) ۲- هیپرگلایسمی (۲۵ میلی مولار گلوگز) ۳- اسمولی (۵ میلی مولار گلوکز +۲۰ میلی مولار مانیتول) ۴- (هیپرگلایسمی + میمیک) ۵- (هیپرگلایسمی + آنتاگومیر) ۶- (هیپرگلایسمی +Scramble) ( کنترل+ میمیک) ۸- (کنترل + آنتاگومیر). میزان مورد استفاده میمیک و آنتاگومیر و Scramble هر کدام ۲۰ نانو مول است. سلول ها در پلیت های ۶ خانه ای، در غلظت ۳x۱۰ سلول و ۲۳۰۰ میکرولیتر مدیا تقسیم شدند و ترانسفکشن microRNA به طور همزمان با ایجاد هیپرگلایسمی انجام شد. ۲۴ ساعت بعد از انجام ترانسفکشن MicroRNA، جهت استخراج RNA طبق دستوالمعل کیت miRNeasy mini Kit استخراج شد و در دمای ۲۰OC تا زمان سنتر cDNA نگهداری شد. سنتر cDNA نگهداری شد. سنتر cDNA طبق دستورالعمل کیت miScript II RT cDNA synthesis Kit انجام شد. سپس RT-PCR طبق دستورالعمل کیت miScript SYBR Green RT- PCR Kit برای تمام گروه ها به صورت DUplicate در دستگاه Corbett Rotor - Gene RG- ۶۰۰۰ انجام شد. همچنین از کیت الایزا برای ارزیابی فعالیت NF- KB استفاده شد. جهت مقایسه تفاوت موجود در بین گروه ها از آزمون تحلیل کوارپانس (ANCOVA) و جهت تجزیه و تحلیل داده ها از نرم افزار SPSS نسخه ۲۱ استفاده شد. نتایج: بیان ژن miR-۱۶A در گروههای کنترل + میمیک و هیپرگلایسمی + میمیک افزایش می باید (به ترتیب P<0.01 , P>0.001)و در گروه های ( منترل + آنتاگومیر) و (هیپرگلایسمی + آنتاگومیر) کاهش می بابد (P<0.01). بیان ژن miR-۱۴۶a در گروه (هاپرگلایسمی + Scramble) در مقایسه با گروه هیپرگلایسمی معنی دار نبود. در گروه سلولی هیپرگلایسمی فعالیت NF-KB به طور قابل ملاحظه ای در مقایسه با گروه کنترل یافت (P<0.05). علاوه بر این، با ترانسفکشن Mimic miR-۱۴۶a به محیط هیپرگلایسمی مشاهده شد که اگر چه میران فعالیت NF-KB در مقایسه با گروه کنترل افزایش داشت (P<0.05)، اما در مقایسه با گروه هیپرگلایسمی به طور قابل ملاحظه ای فعالیت NF-KB کاهش یافت (P<0.01). همچنین با ترانسفکشن Antagomir miR-۱۴۶a به محیط هیپرگلایسمی فعالیت NF-KB در مقایسه با گروه هیپرگلایسمی افرایش یافت (P<0.01). این نتایج نشان می دهد که miR-۱۴۶a در شرایط هیپرگلایسمی فعالیت NF-KB را کاهش می دهد بیان ژن NF-KB در گروه سلولی هیپرگلایسمی در مقایسه با گروه کنترل حدود ۱۰ برابر افزایش داشت (P>0.01). با تراتسفکشن mimic miR-۱۴۶a به محیط هیپرگلایسمی مشاهده شد که در مقایسه با گروه هیپرگلایسمی، بیان ژنی NF-KB افزایش یافت (P<0/001) و نیز ترانسفکشن AntagomiR miR-۱۴۶a به گروه هیپرگلایسمی بطور توجهی از افزایش بیان ژنی NF-KB جلوگیری کرد (P<0/01). این نتایج نشان می دهد که miR-۱۴۶a در شرایط هیپرگلایسمی بیان ژن NF-KB را افزایش می دهد. بحث و نتیجه گیری: یکی از یافته های این مطالعه این است که افزایش miR-۱۴a در سلول های اندوتلیال عروقی طی شرایط هیپرگلایسمیک باعث افزایش بیان ژنی NF-K می شود. بطوری که وقتی که به سلول های اندوتلیال در شرایط هیپرگلایسمی، mimic miR-۱۴۶a ترانسفکت شد به طور قابل توجهی فعالیت NF-KB کاهش، بیان ژن آن افزایش یافت. اینکه اثر miR-۱۴۶a بر بیان ژن NF-KB بصورت مستقیم است یا یک واکنش جبرانی در پاسخ به کاهش فعالیت NF-KB، هنوز معلوم نیست و نیاز به مطالعات دقیق تر نظیر microRNA reportr assy دارد. شاید یک توضیح برای توجیه این مشاهده این باشد miR-۱۴۶aاز طریق کاهش فعالیت NF-KB به صورت غیر مستقیم با فعال کردت مکانسیم های جبرانی باعث افزایش بیان ژن NF-KB شده باشد. به هر حال این اولین مطالعه ای می باشد. که به نقش احتمالی miR-۱۴۶a بر میزان فعالیت و بیان ژن NF-KB در سلول های اتدوتلیال عروقی بند ناف انسانی در شرایط هیپرگلایسمی اشاره می کند و تایید و یا رد این نتایج به مطالعات تکمیلی نیاز ندارد.

Item Type: Thesis (Masters)
Thesis Type: Masters
Keywords: هیپرگلایسمی NF-KB HUVecs mir
Supervisor:
Supervisor NameEmail
قدیری صوفی, فرهادUNSPECIFIED
کاتبی, مجیدUNSPECIFIED
Subjects: QS Human Anatomy > QS1-132 Anatomy
Divisions: Education Vice-Chancellor Department > Faculty of Medicine > Department of Basic Science > Department of Physiology Medical
Depositing User: کتابخانه مرکزی دانشگاه علوم پزشکی هرمزگان
URI: http://eprints.hums.ac.ir/id/eprint/6190

Actions (login required)

View Item View Item