Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Hormozgan University of Medical Sciences

ساخت و کلونینگ وکتور بیانی نوترکیب حاوی ژن CD20 انسانی با هدف ایمونوتراپی برای لنفومای غیر هوجکین

(2016) ساخت و کلونینگ وکتور بیانی نوترکیب حاوی ژن CD20 انسانی با هدف ایمونوتراپی برای لنفومای غیر هوجکین. Hormozgan Medical Journal.

[img]
Preview
Text
hmj-v20n3p177-en.pdf

Download (507kB) | Preview

Persian Abstract

چکیده مقدمه: لنفومای غیرهاجکینی (NHL) سرطانی است که در لنفوسیت ها رخ می دهد. درمان اصلی NHL شیمی درمانی و پرتودرمانی می باشد. امروزه ایمونوتراپی یک روش درمانی امیدوارکننده در درمان انواعی از سرطان هاست که برخلاف روش های قبلی از اختصاصیت بالایی برخوردار است. اندازه بزرگ آنتی بادی ها مانع از نفوذ مؤثر آن ها در بافت توموری می شود. در حالی که نانوبادی ها به دلیل سایز کوچک شان وارد بافت و به اپی توپ ها متصل می شوند. CD20 یک پروتئین در سطح سلول های B می باشد. بیان بالای CD20 در لمفومای غیرهاجکینی و داشتن اپی توپ خارج سلولی تشخیص داده شده با آنتی بادی های مختلف این پروتئین را هدف مناسبی برای ایمونوتراپی با آنتی بادی مونوکلونال ساخته است. هدف از این مطالعه، طراحی و کلونینگ وکتور بیانی نوترکیب حاوی لوپ خارج سلولی CD20 انسانی، ناحیه لولا و Fc ایمونوگلوبین شتر می باشد. نویسنده مسئول: دکتر مجتبی طهمورث پور دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد مشهد - ایران تلفن: 9151159911 98+ پست الکترونیکی: mtahmoorespur@yahoo.com روش کار: در این مطالعه، ما قطعه ای شامل لوپ خارج سلولی CD20 انسانی و نواحی لولا و Fc ایمونوگلوبین G شتری را ساختیم. سپس دو ناحیه برشی آنزیم های محدودالاثر HindIII و Xho1 و 6 اسید آمینه هیستیدین جهت خالص سازی به قطعه اضافه شد. کدون پایان در انتهای توالی قرار گرفت. توالی کد کننده ی مهندسی شده توسط شرکت Genray چین سنتز و برای دست یابی به وکتور بیانی نوترکیب درون وکتور بیانی pcDNA3.1+ الحاق گردید. جهت تأیید واکنش لیگاسیون، Colony PCR، توالی یابی و هضم انجام شد. نتایج: نتایج کلونی PCR، یک قطعه به طول 1132 kb را نشان داد. همچنین تعیین توالی و هضم صحت واکنش الحاق را تأیید کرد. نتیجه گیری: ما به یک pcDNA3.1+ نوترکیب حاوی ژن hCD20 به عنوان یک ناقل بیانی کارآمد در بیان پـروتئین نوترکیـب در سلول پستاندار دست یافتیم که می تواند جهت تولید آنتی بادی مونوکلونال علیه CD20 انسانی استفاده شود.

Title

Construction and cloning of a recombinant expression vector containing human Cd20 Gene for antibody therapy in Non-Hodgkin Lymphoma

Abstract

ABSTRACT Introduction: Non-Hodgkin lymphoma (NHL) is a cancer that starts in lymphocytes. The main treatment for NHL is chemotherapy and radiation. Today immunotherapy is a promising therapeutic approach in the treatment of a variety cancers which is high specific unlike previous methods. Antibodies do not penetrate effectively into tumore tissues because of their large size. Whereas the small size of nanobodies (Camelid single-domain antibodies) allow them to efficiently enter into tissues and bind to the epitopes. Human CD20 over expression in the B-cell lymphoma makes this antigen as a validated target for immunotherapy. One major problem in production of full length CD20 is aggregation and misfolding. Therefore, production of a polypeptide is easer and favorable comparing to that of a full length transmembrane protein CD20. Correspondence: Mojtaba Tahmoorespur, PhD. Department of Animal Science, Ferdowsi University of Mashhad. Mashhad, Iran Tel:+98 9151159911 Email: mtahmoorespur@yahoo.com Methods: The fragment consisting of human CD20 extra membrane loop and hinge and Fc of camelid IgG was constructed. Then it was facilitated by HindIII and XhoI restriction enzyme sites and fused to the 6× His tag for purifiction. The stop codon was engineered in the terminal sequence. The engineered coding sequence was synthesized by Generay Company and then inserted into the pcDNA3.1 (+) vector to obtain recombinant expression vector. The accuracy of ligation reaction was confirmed by colony PCR, sequencing and digestion. Results: The colony PCR result showed 1132 kb fragment. The results of digestion and sequencing showed that the protein was what we had hoped to acquire. Conclusion: We have obtained the recombinant expression vector inorder to express in mammalian cell which can be used to produce novel anti-human CD20 monoclonal antibody in future.

Item Type: Article
Keywords: B-lymphocyte Antigen, Monoclonal Antibody, Non-Hodgkin's Lymphoma
Persian Keywords: آنتی ژن لمفوسیت B, آنتی بادی مونوکلونال, لنفومای غیر - هوجکینی
Subjects: general
Divisions: Research Vice-Chancellor Department > Hormozgan Medical Journal
Depositing User: مهندس مهدی شریفی
URI: http://eprints.hums.ac.ir/id/eprint/525

Actions (login required)

View Item View Item