Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Hormozgan University of Medical Sciences

Thesis #2584

[error in script] (2015) نقش ‮‭microRNA-146a‬ بر بیان ژنی فاکتور هسته ای کاپای ‮‭B‬ در سلولهای اندوتلیال عروق بند ناف انسانی طی هیپرگلایسمی. پایان نامه مقطع Masters.

[img] Image
1340.jpg
Restricted to Repository staff only

Download (258kB)

Abstract

دیابت یک اختلال متابولیک است که با هیپرگلایسمی مداوم همراه بوده و از ترشح ناکافی انسولین ، کاهش حساسیت بافتی به انسولین و با هر دو عامل مذکور ناشی دیابت مزمن معملا باعث عوارض میکرو و ماکروآنژیومیوپاتی، رتینوپاتی، نوروپاتی و نفروپاتی می گردد. اعتقاد بر این است که هایپرگلایسمی از طریق مختلف از جمله بر هم زدن تعادل اکسید و احیای سلولی منجر به فعال شدن فعالیت فاکتور هسته ای کاپا - نوع ‮‭Nuclear Factor Kappa B,NF-KB(‬) که یک فاکتور نسخه برداری التهابی است. ‮‭NF-KB‬ پس از فعال شدن، نسخه برداری ژن سایتوکاین های التهابی را افزایش می دهد. به این ترتیب منجر به پیشبرد التهاب می شود. ‮‭MicroRNA‬ها گروهی از ‮‭RNA‬های درونزاد کوچک تک رشته ای (حاوی ‮‭20‬ الی ‮‭26‬ نوکلئوتید) و غیر قابل کد شدن هستند که توسط ‮‭RNA‬ پلی مراز ‮‭II‬ و ‮‭III‬ در هسته سلول ساخته شده و پس از مهاجرت به سیتوپلاسم، با اثر بر ‮‭RNA‬های پیک ‮‭mRNA(‬) و مهار ترجمه و یا افزایش تخریب آن‌ها، در تنظیم فرآیندهای نسخه برداری و سنتر پروتئین ها شرکت می کنند و در فرآیندهای فیزیولوژیک متعدد نظیر رشد، تمایز و مرگ سلولی و نیز در بروز پاسخ های ایمنی و التهابی نقش دارند.‮‭miR -146a‬ یکی از ‮‭MicroRNA‬ها است که مهمترین نقش آن در فرآیندهای التهابی نشان داده شده و به یک ‮‭MicroRNA‬ التهابی موسوم است. همچنین نشان داده شده که نقش خود را در فرآیندهای التهابی از طریق تغییر فعالیت ‮‭NF-KB‬ انجام می دهد. با توجه به فعال شدن ‮‭NF-KB‬ انجام می‌دهد. با توجه به فعال شدن ‮‭NF-KB‬ طی هیپرگلایسمی ناشی از دیابت احتمال می‌رود‮‭miR-146a‬ در پاتوژنز دیابت نقش داشته باشد. هدف از مطالعه حاضر بررسی نقش ‮‭microRNA-146a‬ بر بیان ژنی ‮‭NF-KB‬ در سلول های اندوتلیال عروقی طی هیپرگلایسمی می باشد. مواد و روش ها: کشت سلول: سلول های اندوتلیال عروق بند انسانی ‮‭HUVECs(‬) در محیط کشت ویژه سلول های اندوتلیال کشت داده شدند. پس از رشد سلول ها و افزایش تعداد آن ها به هشت گروه که شامل: ‮‭۱‬- کنترل ‮‭5(‬ میلی مولار گلوکز) ‮‭۲‬- هیپرگلایسمی ‮‭25(‬ میلی مولار گلوکز) ‮‭5( -3‬ میلی مولار گلولز +‮‭20‬ میلی مولار مانیتول) ‮‭-4‬ (هیپرگلایسمی + میمیک) ‮‭5‬ - (هیپرگلایسمی + آنتاگومیر) ‮‭6‬ - (هیپرگلایسمی +‮‭-7 )Scramble‬ (کنترل + میمیک) ‮‭-8‬ (کنترل + آنتاگومیر). میزان مورد استفاده میمیک و آنتاگومیر و ‮‭Scramble‬ هر کدام ‮‭20‬ نانو مول است. سلول ها در پلیت های ‮‭6‬ خانه ای در غلظت ‮‭3x10‬ سلول و ‮‭2300‬ میکرولیتر مدیا تقسیم شدند و ترانسفکشن ‮‭MicroRNA‬ به طور همزمان با ایجاد هیپرگلایسمی انجام شد. ‮‭24‬ ساعت بعد از انجام ترانسفکشن ‮‭MicroR NA‬، جهت استخراج ‮‭RNA‬ طبق دستور العمل کیت ‮‭miRNeasY Mini Kit‬ استخراج شد و در دمای ‮‭20o‬- تا زمان سنتز ‮‭cDNA‬ نگهداری شد. سنتز ‮‭cDNA‬ طبق دستورالعمل کیت ‮‭miScript IIRT cDNA synthesis Kht‬ انجام شد. سپس ‮‭RT,PCR‬ طبق دستور العمل کیت ‮‭miScrpt SYBR Green RT- PCR Kit‬ برای تمام گروه‌ها به صورت ‮‭Duplicate‬ در دستگاه ‮‭Corbett Rotor- Gene RG-6000‬ انجام شد. همچنین از کیت الایزا برای ارزیابی فعالیت ‮‭NF-KB‬ استفاده شد. جهت مقایسه تفاوت موجود در بین گروه ها از آزمون تحلیل کواریانس ‮‭ANCOVA(‬) و جهت تجزیه و تحلیل داده ها از نرم افزار ‮‭SPSS‬ نسخه ‮‭21‬ استفاده شد. نتایج: بیان ژن ‮‭miR-146a‬ در گروه های کنترل + میمیک و هیپرگلایسمی + میمیک افزایش می‌یابد (به ترتیب ‮‭P>0.01‬ و ‮‭) P>0.001‬ و در گروه های (کنترل + آنتاگومیر) و ( هیپرگلایسمی + آنتاگ‌ومیر) کاهش می یابد ‮‭.)P>0.01(‬ بیان ژن ‮‭miR-146a‬ در گروه (هاپرگلایسمی +‮‭Scramble‬) در مقایسه با گروه هیپر گلایسمی معنی دار نبود. در گروه سلولی هیپرگلایسمی فعالیت ‮‭NF-KB‬ به طور قابل ملاحظه ای در مقایسه با گروه کنترل افزایش یافت ‮‭.)P>0.01(‬ علاوه بر این، با ترانسفکشن ‮‭Mimic miR-146a‬ به محیط هیپرگلایسمی مشاهده شد که اگر چه میزان فعالیت ‮‭NF-KB‬ در مقایسه با گروه کنترل افزایش داشت ‮‭P>0.05(‬)، اما در مقایسه با گروه هیپرگلایسمی به طور قابل ملاحظه ای فعالیت ‮‭NF-KB‬ کاهش یافت ‮‭.)P>0.05(‬ همچنین با ترانسفکشن ‮‭Antagomir mir-14a‬ به محیط هیپرگلایسمی فعالیت ‮‭NF-KB‬ مقایسه با گروه هیپرگلایسمی افزایش یافت ‮‭P>0.01(‬) این نتایج نشان می‌دهد که ‮‭miR-146a‬ در شرایط هیپرگلایسمی فعالیت ‮‭NF-KB‬ را کاهش می‌دهد بیان ژن ‮‭NF-KB‬ در گروه سلولی هیپرگلایسمی در مقایسه با گروه کنترل حدود برابر افزایش داشت ‮‭.)P>0.01(‬ با ترانسفکشن به ‮‭Mimic miR-146a‬ محیط هیپرگلایسمی مشاهده شد که در مقایسه با گروه هیپرگلایسمی، بیان ژنی ‮‭NF-KB‬ افزایش یافت ‮‭P>0/001(‬) و نیز ترانسفکشن ‮‭AntagomiR-146a‬ به گروه هیپرگلایسمی بطور قابل توجهی از افزایش بیان ژنی ‮‭NF-KB‬ جلوگیری کرد ‮‭.)P>0/01(‬ این نتایج نشان می دهد که ‮‭miR-146a‬ در شرایط هیپرگلایسمی بیان ژن ‮‭NF-KB‬ را افزایش می‌دهد. بحث و نتیجه گیری: یکی از یافته های این مطالعه این است که افزایش ‮‭miR-146a‬ در سلول های اندوتلیال عروقی طی شرایط هیپرگلایسمیک باعث افزایش بیان ژنی ‮‭NF-KB‬ می شود.بطوری که وقتی که به سلول های اندوتلیال در شرایط هیپرگلایسمی، ‮‭mimic miR-146a‬ ترانسفکت شد به طور قابل توجهی فعالیت ‮‭NF-KB‬ کاهش، بیان ژن آن افزایش یافت . اینکه اثر ‮‭miR-146a‬ بر بیان ژن ‮‭NF-KB‬ بصورت مستقیم است با یک واکنش جبرانی در پاسخ به کاهش فعالیت ‮‭NF-KB‬، هنوز معلوم نیست و نیاز به مطالعات دقیق تر نظیر ‮‭microRNA reporter assy‬ دارد. شاید یک توصیح برای توجیه این مشاهده این باشد ‮‭miR-146a‬ از طریق کاهش فعالیت ‮‭NF-KB‬ به صورت غیر مسقسم با فعال کردن مکانیسم های جبرانی باعث افزایش بیان ژن ‮‭NF-KB‬ شده باشد به هر حال این اولین مطالعه ای می باشد که به نقش احتمالی ‮‭miR-146a‬ بر میزان فعالیت و بیان ژن ‮‭NF-KB‬ در سلولهای اندوتلیال عروقی بند ناف انسانی در شرایط هیپرگلایسمی اشاره می کند و تایید و یا رد این نتایج به مطالعات تکمیلی نیاز دارد. واژگان کلیدی: هیپرگلایسمی، ‮‭miR-146a, HUVECs,NF-KB‬

Item Type: Thesis (Masters)
Thesis Type: Masters
Keywords: هیپرگلایسمی، ‮‭miR-146a, HUVECs,NF-K
Supervisor:
Supervisor NameEmail
قدیری صوفی, فرهادUNSPECIFIED
Subjects: genetic
Divisions: Education Vice-Chancellor Department > Faculty of Medicine > Departments of Clinical Sciences > Department of Internal
Depositing User: کتابخانه مرکزی دانشگاه علوم پزشکی هرمزگان
URI: http://eprints.hums.ac.ir/id/eprint/2584

Actions (login required)

View Item View Item